近日，由贵州省兽药饲料检测所等单位起草，TC76(全国饲料工业标准化技术委员会)归口的国家标准计划《饲料中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的测定 高效液相色谱法》征求意见稿已编制完成，现公开征求意见。
β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯又叫阿朴胡萝卜素酸乙酯、天然橙 7 号或阿朴酯等，是类胡萝卜素中一种含氧的阿朴胡萝卜素类化合物，在食品工业中主要应用于食用油脂、人造奶油、果酱、果冻及饮品类产品的着色。在饲料工业中广泛应用于肉禽，尤其是肉鸡的皮肤、脚胫、脂肪的着色以及禽类蛋黄的着色，在目标组织中沉积率较高，着色效果显著高于β-阿朴-8′-胡萝卜素醛及万寿菊提取物。部分文献表明，家禽日粮中添加一定量的β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯可提高家禽机体免疫力，促进雏禽发育。
β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯使用广泛、添加混乱、检测标准缺失、养殖者认知匮乏、不利监管等问题。一是禽饲料中使用广泛。2019年至今，贵州省兽药饲料检测所累计检测11个省禽饲料 409 批，β-阿朴-8’-胡萝卜酸乙酯检出率 24.7%，配合饲料、浓缩饲料及添加剂预混合饲料折算为日粮含量主要在2.0～10.0mg/kg。二是添加剂中未检出。累计检测添加剂及混合型添加剂24批，均未检出β-阿朴-8’-胡萝卜酸乙酯。添加剂中添加会增加成本，在养殖者无需求，不会添加或添加廉价的着色剂。三是没有法定检测方法标准，国内尚无饲料中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯含量检测推荐性国家标准或行业标准，各级管理部门无法开展执法检验；四是使用现状混乱无规律。养殖者对添加阶段、添加量、添加配比、添加时间、成色效果的使用没有标准。因此，建立一种快速、准确测定饲料中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯含量的标准方法，填补技术空白，有利于行业主管部门开展饲料中着色剂规范使用监管工作，指导安全、科学、绿色养殖，确保饲料和禽产品的质量安全，引导社会健康消费，保障人民的身体健康，推动产业高质量发展。
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件描述了饲料中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的高效液相色谱测定方法。本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料和混合型饲料添加剂中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的测定。
本文件配合饲料、浓缩饲料、精料补充料中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的检出限为0.15mg/kg、定量限为0.50mg/kg，添加剂预混合饲料、混合型饲料添加剂中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯的检出限为1.5mg/kg、定量限为5.0mg/kg。
原理：
试样中β-阿朴-8′-胡萝卜素酸乙酯经水分散、乙醇和二氯甲烷提取、固相萃取柱净化，用高效液相色谱仪检测，外标法定量。
仪器设备：
1.高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。
2.分析天平：感量为0.1g和0.00001g。
3.离心机：转速不低于8000r/min。
4.超声波清洗仪。
5.固相萃取装置。
6.氮吹仪。
高效液相色谱参考条件：
高效液相色谱参考条件如下：
a)色谱柱：Waters Symmetry® C18柱2，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或性能相当者；
b)柱温：30℃；
c)检测波长：445nm；
d)流动相：乙腈+甲醇= 20+80；
e)流速：1.0mL/min；
f)进样量：20µL。
精密度：
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过该算术平均值的10%。
